柑桔黄龙病病原培养及免疫诊断

 

　　该技术针对柑桔的毁灭性病害黄龙病，对黄龙病类细菌进行分离培养，研制半合成培养基的配方，制定了从病叶叶脉分离 BLO的培养方法，建立了BLO分离培养技术。用人工培养的 BLO活菌或 BLO蛋白免疫小鼠(或家兔)制得单克隆抗体及免疫血清，并创立了下列4种免疫诊断方法：①酶联免疫吸附分析法(ELISA)，即用辣根过氧化物酶标记单克隆抗体，以联苯二胺为显色剂，将柑桔叶子的匀浆作材料，3天内可得正确结果；②酶标免疫定位法，即用辣根过氧化物酶标记单克隆抗体，以联苯二胺为显色剂，将柑桔叶子的叶脉徒手切片作材料，此法为定性分析， l.5天内可得结果；②荧光抗体检验法，即用培养病原的免疫血清或单克隆抗体作*抗体，以异硫氰荧光素(FITC)标记的IgG(羊抗鼠或羊抗兔)作第二抗体，将柑桔叶子的叶脉作徒手切片为材料，此法属定性分析方法；④胶体金一银标记免疫检测法，即用胶体金标记免疫血清或单克隆抗体，以硝酸银作染色剂，将柑桔叶子的叶脉徒手切片作材料，也属定性分析方法，在6小时内完成检测。上述技术实现了柑桔发病前的预知诊断，防止了病害流行，提高了果树的生产能力。